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　　產(chǎn)品簡介：

　　本公司生產(chǎn)的BCA蛋白濃度測定試劑盒是根據(jù)目前廣泛應用的蛋白濃度檢測方法之一BCA法研制而成。其操作簡單，靈敏度高，所形成的顏色復合物穩(wěn)定性佳，受干擾物質(zhì)影響小。可檢測濃度下限達25 μg/mL的蛋白樣品，*小檢測蛋白量達到0.5 μg，待測樣品體積為1-20 μL。 本產(chǎn)品主要成分為：BCA二鈉鹽，無水碳酸鈉，酒石酸鉀，氫氧化鈉，碳酸氫鈉和硫酸銅。

　　包裝內(nèi)容：

　　保存條件：

　　蛋白標準品4℃保存，溶解后應放-20℃保存。其余試劑常溫保存。有效期12個月。

　　使用方法：

　　1.取1 mL蛋白標準配置液加入到25 mgBSA的蛋白標準管中，完全溶解蛋白標準品，即為25 mg/mL的蛋白標準溶液。配制成的蛋白標準溶液可-20℃長期保存。

　　2.取適量25 mg/mL蛋白標準溶液，稀釋至終濃度為0.5 mg/mL。標準品*好與蛋白樣品用同樣的溶液稀釋。但為了簡便起見，通常使用0.9% NaCl或PBS稀釋標準品。

　　3.做標準曲線。將標準品按0，1，2，4，8，12，16，20μL加到96孔板中，不足20 μL的加標準品稀釋液補足到20 μL。

　　4.將待測的蛋白樣品稀釋至合適濃度，加到96孔板中，使待測樣品總體積也為20 μL。

　　5.根據(jù)樣品數(shù)量，按50體積BCA試劑加1體積硫酸銅溶液(50：1)配制適量BCA工作液，充分混勻。BCA工作液室溫24小時內(nèi)穩(wěn)定。

　　6.每孔加入BCA工作液200 μL，充分混勻(可將酶標板放在振蕩器上振蕩30s)，37℃放置30 min后，以標準曲線0號做參比，在562nm波長下比色測定，記錄各孔吸光度值。(注：也可以在室溫放置2 h，或60℃放置30 min。如果蛋白濃度較低，*好放在60℃條件下反應。)

　　7.以標準品蛋白含量(μg)為橫坐標，吸光值為縱坐標，繪出標準曲線。根據(jù)所測樣品的吸光值，在標準曲線上即可查得相應的蛋白含量(μg)，除以樣品稀釋液總體積(20 μL)，乘以樣品稀釋倍數(shù)即為樣品實際濃度。

　　注意事項：

　　1.BCA法測定蛋白濃度受溫度和時間的影響較大，吸光度值會隨著時間的延長不斷升高，且顯色反應會因溫度的升高而加快。如果不能**控制顯色反應的時間和溫度，建議每次測定都需要做標準曲線。

　　2.本試劑也適用與分光光度計測定，但需要根據(jù)測定的*小體積調(diào)整樣品和BCA工作液的用量。

　　3.為保證蛋白的**定量，樣品的提取和標準蛋白的配制*好選用相同的緩沖液，同時也要保證兩者檢測條件的一致性。如果緩沖液本身就有較高的背景值，建議使用其他的方法測定。

　　4.BCA法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學物質(zhì)的影響，可以兼容樣品中高達5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20，Tween 60，Tween 80。但在樣品含有脂類物質(zhì)時將明顯提高吸光度值。且受螯合劑和略高濃度的還原劑的影響，需確保EDTA低于10mM，無EGTA，二硫蘇糖醇或β-巰基乙醇低于1mM。不適用BCA法時建議使用其他方法測定。

G2026-BCA蛋白濃度測定試劑盒2020-10-28修改.pdf